Сущность серологических методов исследования состоит в определении титра антител в сыворотке крови больного в динамике болезни по отношению к известному антигену, вводимому в серологическую реакцию.

В клинической практике чаще всего используется реакция агглютинации (РА) Видаля , ее разновидности, РНГА, РСК и более информативные современные методы (ИФА, РИА, ЛИФА и др.).

РА — определение неизвестных антител с помощью известных антигенов и установление вида возбудителя с помощью известных антител. РИГА и РНГА — более специфичны, используются меченные эритроциты. РТГА — основан на способности некоторых вирусов агглютинировать эритроциты. РИ — реакция иммунодиффузии, различная способность антигенов и антител диффундировать в геле. РСК титрование антигенов или антител по степени фиксации комплемента с комплексом антиген-антитело. PH — способность антител нейтрализовать токсины и антигены вирусов. ИФА — используются антитела, конъюгированные с ферментом. РИА — используется радиоактивная метка антигенов или антител. ЛИФА — лантанидный иммунофлюоресцентный анализ — используются в качестве метки элементы редкоземельных металлов.

Забор крови для серологического исследования выполняется так же, как и при посеве, но в отличие от последнего, его лучше осуществлять самотеком, а не шприцом. Для этого берут иглу с более широким просветом и вводят в локтевую вену без шприца. В пробирку собирают 3-5 мл крови. При таком сборе эритроциты меньше травмируются и сыворотка крови реже бывает с явлениями гемолиза. После отстаивания и центрифугирования крови сыворотку с помощью пипетки переносят в другую пробирку или эпиндорф и хранят в холодильнике при температуре +4 °С до постановки реакции. Поскольку иммунный ответ при большинстве инфекционных болезней развивается с 5-7-го дня, а максимальное нарастание титра антител происходит лишь в периоде реконвалесценции, серологические методы менее пригодны для ранней диагностики и используются главным образом в целях ретроспективной расшифровки этиологии уже перенесенного инфекционного заболевания.

Однако кровь для серологических исследований берется и в первые дни болезни , что в дальнейшем дает возможность наблюдать за нарастанием титра антител в динамике заболевания. Повторные серологические исследования при бактериальных инфекциях производятся не раньше, чем через 5-7 дней. При вирусных заболеваниях берутся «парные сыворотки» с интервалом 10-12 дней и при нарастании титра антител в 4 раза и более подтверждается диагноз предполагаемого заболевания.

Структура ответа. Методы серологической диагностики, суть. Правила забора крови. Трактовка результатов. Парные сыворотки.

Более новые статьи:

• Патогенетическая терапия инфекционных больных — Виды патогенетической терапии, группы препаратов, примеры заболеваний — 17/08/2012 07:55

Серологическое исследование, или, другими словами — серологический анализ, это исследование биологических материалов в лаборатории. Этот анализ позволяет установить наличие болезнетворных бактерий в исследуемом организме, либо — в продуктах, которые проходят контрольную проверку.

Серологические методы диагностики

Исследование сывороток или других биологических объектов (молока, желчи, слюны, смывов слизистой кишечника, а также — копроматериалов) дает достаточно достоверное представление об ответе организма на внедрение инфекционного агента. Следует отметить, что применение серологических методов исследования имеет не только диагностическое значение, но дает достоверные сведения об уровне защиты организма, состоянии популяционного иммунитета, циркуляции различных типов в обследуемом регионе. Результаты серологических обследований могут также дать информацию для оптимизации антигенного состава профилактических препаратов и использоваться с целью оценки иммунологической эффективности вакцин.

Однако нужно отметить, что необходимость исследования парных сывороток крови, забираемых с интервалами 1,5-2 недели, и наличие экспрессных методов диагностики снижают диагностическую ценность серологических реакций.

Поэтому традиционные серологические тесты — реакции связывания комплемента (РСК) и реакция торможения гемагглютинации (РТГА), находят в настоящее время лишь ограниченное применение. Тем не менее простота этих методов, доступность и дешевизна реагентов делают их еще применимыми в лабораторной практике. Постановка РСК и РТГА осуществляется по общепринятым методикам.

Примером использования РСК для изучения поствакцинального иммунитета является работа К. Мидхана (1989 г.). При обследовании сывороток от 116 детей в возрасте 5 месяцев достоверные сероконверсии, по данным РСК, были отмечены в 44% случаев, а по результатам реакции нейтрализации (PH) и имму-ноферментного анализа (ИФА) — в 83 и 96% соответственно.

Исследование иммунитета

С целью изучения популяционного иммунитета с помощью РСК нами было обследовано 1246 сывороток больных ОКЗ в возрасте от нескольких месяцев до 80 лет и старше. Показано, что среднегеометрические титры комплементсвязывающих антител были наиболее высокими в возрастных группах 2 — 4 и старше 60 лет, что подтверждает полученные нами ранее данные о наибольшем распространении ротавирусной инфекции среди лиц указанных возрастных групп.

Анализ на ротавирус

РТГА используется в изучении ротавирусной инфекции чаще, чем РСК, и, как правило, в сочетании с другими лабораторными тестами. Так, Andrade J. Р. et al. применили РТГА, иммуно-блот, блок ИФА для изучения антител к структурным белкам ротавируса VP2, VP4, VP6 й VP7. По данным авторов, у детей от 2 до 4 лет обнаружили антигемагглютинирующие антитела к ротавирусам в 70-80%.

В зависимости от уровня антител к определенным белкам, по данным РТГА, авторы выделили 4 группы лиц. В I и II группы (60%) вошли дети с высоким уровнем антител к VP4 и VP7 и были классифицированы как «иммунные». В III группу (4%) отнесены лица с низким уровнем антител к VP7 и VP6, так называемые «частично иммунные». Дети IV группы (36%), у которых, по данным РТГА, антитела не были обнаружены, обозначены как «неиммунные» и составили группу риска, т. к. среди них возможно развитие выраженной ротавирусной инфекции. Следует отметить, что в данном наблюдении показатели чувствительности РТГА и блок ИФА были вполне сопоставимы.

РТГА неоднократно использовали для изучения структурного белка VP4. Исследования показали, что его гемагглютинирующая активность специфически ингибируется антисывороткой, тем самым подтверждая, что VP4 является гемагглютинином ротавирусов. Аналогичные данные были опубликованы ранее М. Езекиелем (1995 г.).

Таким образом, представленные работы показывают, что РСК и РТГА все еще применяют при изучении ротавирусной инфекции, однако эти методы носят вспомогательный характер и должны дублироваться другими тестами.

Нейтрализационные тесты

Реакция нейтрализации основана на способности иммунных сывороток человека или животных нейтрализовать репродукцию вируса и тем самым предотвратить связанные с этим феноменом проявления. В зависимости от биологической модели этими проявлениями могут быть: развитие заболевания со специфической клиникой, репродукция и выделение вируса, выработка специфических антител, а также появление цитопатического эффекта или образование пляк при использовании культуры клеток.

Макробиологические модели в настоящее время применяются преимущественно в ветеринарии, обнаружение вирусов у людей в большинстве случаев проводится на культуре клеток, как первичных, так и переливаемых. Методы PH подразделяются на две группы по принципиальной схеме постановки. В одной группе методов неразведенная сыворотка соединяется с серийными разведениями вируса, в другой — разведения сыворотки испытываются с постоянной дозой вируса. Для постановки реакции нейтрализации предпочтителен возбудитель, вызывающий выраженный цитопатический эффект или интенсивно репродуцирующийся в биологической модели.

Для измерения титров вируснейтрализующих антител используют и модифицированную PH посредством блокирования ИФА с помощью моноклональных антител.

• изучению интенсивности выработки вируснейтрализующих антител (ВНА) при естественной инфекции и вакцинации;
• образованию ВНА к различным структурным белкам ротавирусов;
• оценке роли ВНА сывороток крови и секреторных антител слюны и слизистой кишечника в защите от естественной инфекции (Ward R. et al., 1990, 1992, 1993, 1995, 1997).

В заключение необходимо подчеркнуть, что реакция нейтрализации в различных ее модификациях до настоящего времени широко используется как в экспериментальных, так и клинических исследованиях и, обладая высокой чувствительностью и специфичностью, служит эталоном для всех других серологических методов.

Анализ крови методом РПГА, также могут назначить для поверки на:

• корь;
• дифтерию;
• столбняк;
• коклюш;
• сальмонеллёз.

Обязательно нужен при оформлении некоторых документов, например, санитарной книжки, и для подготовки к хирургическому вмешательству.

НЕТРЕПОНЕМНЫЕ ТЕСТЫ

Реакция Вассермана- РВ, RW, в среднем, становится положительной на 4-6 неделе заболевания. С увеличением поступления возбудителя сифилиса в кровь растет и титр RW. Своего максимума он достигает во вторичном рецидивном периоде сифилиса. При поздних формах заболевания реакция Вассермана нередко становится отрицательной.

Результат реакции Вассермана определяется наличием или отсутствием гемолиза. RW резко положительная — ++++, полная задержка гемолиза, RW положительная -+++, значительная задержка гемолиза, слабоположительная rw -++, +- сомнительная RW- частичная и соответственно незначительная задержка гемолиза. Отрицательная RW — полный гемолиз.

Недостатком RW является ее неспецифичность, т.е. реакция Вассермана становится положительной при отсутствиии сифилиса. Такой анализ называется ложноположительный.

Реакция Вассермана может быть ложноположительной при различных заболеваниях и состояниях — болезни соединительной ткани ( системная красная волчанка, системная склеродермия, дерматомиозит), ревматоидный артрит, туберкулез, онкология, болезни крови, заболевания сердечно-сосудистой системы — инфаркт миокарда, сахарный диабет, заболевания почек, беременность , употребление лекарственных препаратов и т.д.

Из-за неспецифичности реакции Вассермана, ее ложных результатов также используются другие реакции.

Реакция микропреципитации (РМП) и ее аналоги: RPR тест — Rapid Plasma Reagins и тест VDRL (Venereal Diseases Research Laboratory) — это нетрепонемные тесты, которые широко применяются в качестве отборочных реакций на сифилис.

Реакцию микропреципитации целесообразно сдавать через 20-30 дней после опасного контакта.

Суть реакции РМП — несколько капель сыворотки крови обследуемого смешивается с кардиолипиновым антигеном, в ходе реакции выпадает осадок — преципитат. Реакция оценивается качественно — по количеству +, от 4+(резко положительный) результат, до1+(сомнительный результат). В случае положительного результата проводят количественную оценку — титрование — максимальное разведение, при котором образуется осадок-преципитат. Результат является положительным начиная с титра 1:2-1:4. В подавляющем большинстве случаев положительный результат микрореакции означает заболевание сифилисом. Однако, микрореакция бывает ложноположительной при системных заболеваниях — системная красная волчанка, ревматоидный артрит, гломерулонефрит, сахарный диабет; при онкологических процессах, заболеваниях сердца — острый инфаркт миокарда, эндокардит, миокардит; при беременности и т.д.

Отрицательный результат микрореакции свидетельствует об отсутствии сифилиса, о раннем серонегативном периоде заболевания, до появления антител в крови. Также микрореакция становится отрицательной или сомнительной при поздних формах сифилиса.

Акция!!! Анализ крови на сифилис, ВИЧ, СПИД, гепатиты — 2500 руб.! Телефон: 8 985 9230340

РМП является одним из критериев достоверности проведенного лечения сифилиса. В отличие от других серологических реакций — РИФ, РИБТ, ИФА, РПГА, после успешного лечения сифилиса РМП становится отрицательной более чем в 90% случаев.

Альтернативы

Так как мы уже выяснили, что ни одна методика, в том числе РПГА, не дает стопроцентной уверенности в результате, не вызывает удивления, что медики назначают обширные обследования. В таких комплексных исследованиях удачно комбинируются как специфические и так неспецифические методы тестирования, что позволяет, практически полностью, исключить вероятность ошибочной диагностики.

Итак, в комплексе с РПГА или вместо неё используют такие неспецифические тесты, как реакцию Вассермана и микрореакцию преципитации. И первый, и второй метод, требуют использования крови из пальца и не используется на начальных этапах течения болезни.

Из специфических тестов, которыми можно заменить РПГА, стоит отметить:

• ИФА или иммуноферментный анализ. Это один из наиболее точных методов диагностики, который обычно назначают, после прохождения неспецифических исследований.
• РИФ или МФА. Метод флуоресцирующих антител. Подходит для диагностики на ранних стадиях.
• TPI — Treponema pallidum immobilization test. Точный метод, но используется, только после четвертого месяца болезни.
• ИБ. Иммуноблоттинг или вестернблоттинг. Новый метод. Очень точный и очень дорогой.
• Лабораторный анализ. Быстрый и недорогой.

Суммируя все написанное, можно сделать вывод, что проверка крови на РПГА, это современный и достаточно точный метод для проверки здоровья. Благодаря тому, что РПГА относительно несложный и недорогой анализ, он используется повсеместно.

Что такое РПГА в анализе крови

Этот способ исследования (реакция пассивной гемагглютинации, РПГА) имеет и второе название: реакция непрямой гемагглютинации (РНГА). И в практике может встретиться как аббревиатура РПГА, так и РНГА. Что это за анализ? Для него необходима центрифугированная сыворотка крови пациента, которую совмещают с особым диагностическим реагентом. Классически он называется «эритроцитарный антигенный диагностикум». Для его приготовления долгие годы использовались клетки красной крови, или эритроциты. Но так было сравнительно давно, а в настоящее время биологический материал уже не используют, и вместо этого применяют микроскопические частицы латекса.

На эти частицы с помощью особой технологии наносят характерные для данного инфекционного возбудителя антигены, которые являются его «визитной карточкой». В результате получается множество частиц, на поверхности которых находятся адсорбированные, и крепко связанные с носителем активные молекулы антигена.

В том случае, если в сыворотке крови пациента находятся выработанные к данному возбудителю антитела, то эти частицы латекса или эритроциты, склеиваются антителами между собой, и выпадают в осадок, который называется агглютинацией (переводе означает «склеивание»). Эту реакцию ставят в специальных планшетах, которые выполнены из пластика и рассчитаны на небольшие объемы. А раньше анализ крови на РПГА проводилась с набором обычных пробирок. В них в разных разведениях находилась кровь пациента, к которой и добавляли диагностикум.

В некоторых случаях применяется зеркальный метод, когда диагностикум содержит не антигены, а антитела. Этот метод (РОНГА, или обратная гемагглютинация) применяется при поиске инфекции, при которых в крови циркулируют токсины, например при ботулизме. В таком случае, если у пациента в крови есть ботулотоксин, то он связывается со специфическими антитоксическими антителами диагностикумов, и также наблюдается реакция агглютинации, которую можно определить в зависимости от разведения сыворотки крови.

Расшифровка складывается из самого факта агглютинации, и того максимального разведения сыворотки крови, при которой она еще уверенно определяется. Чем больше разведена кровь, при которой еще есть агглютинация, тем больше в организме пациента находится антител, и тем выше специфическая напряженность иммунитета при классическом проведении этой реакции. Наиболее часто используется разведения от 1:20 до 1:160 и выше. В настоящее время непрямую РНГА чаще всего используют для первичной диагностики сифилиса.

Справка о сифилисе

Сифилис – хроническое инфекционное ЗППП, вызываемое бледной трепонемой. Бледная трепонема – микроорганизм из порядка спирохет, которые представляют собой бактерии в виде спиралей.

Бледная трепонема в отличие от других спирохет имеет от 8 до 15 завитков, двигается плавно и медленно

Есть несколько путей заражения сифилисом:

1. Прямой (половой), преобладающий.
2. Косвенный (бытовой).
3. Трансплацентарный (от женщины к плоду).

Бледная трепонема способна поражать практически все ткани организма

Сифилис принято разделять на несколько этапов:

1. Инкубационный период.
2. Первичный сифилис.
3. Вторичный сифилис.
4. Третичный сифилис.

Инкубационный период длится около двух недель, при этом нет никаких видимых признаков заражения. Бледная трепонема в этот момент активно осваивается в организме, размножается. Вследствие этого на коже/слизистой, в том месте, через которое попали микроорганизмы, формируется первичный очаг.

Первичный очаг представляет собой узелок, твердый и безболезненный, характерно его покраснение. Такое образование, иначе именуемое твердым шанкром, указывает на начало первичного сифилиса. По прошествии некоторого времени (до 2-3 недель) поражаются ближайшие лимфоузлы.

На фото в центре изъязвленного твердого шанкра красное дно: под ним множество мелких сосудов

Во время вторичного сифилиса на коже больного обнаруживаются множественные высыпания. Они могут быть разных форма и размеров, называются сифилидами. В каждом таком сифилиде содержится огромное количество трепонем, потому период считается самым заразным.

В настоящее время редко встречается последняя стадия, так как она развивается лишь через годы от момента заражения. Кроме того, заболевание вполне успешно поддается лечению, если проходить терапию на первых этапах.

Во время третичного сифилиса поражаются внутренние органы и системы, это может приводить к летальному исходу. Для этого периода характерны гуммы – особые отграниченные зоны воспаления, которые имеют хронический характер. Эта стадия практически не несет опасности для окружающих.

В центре гуммы располагаются трепонемы и зона мертвых клеток (некроза), иммунная система не справляется с их уничтожением. Иммунные клетки вокруг центра видоизменяются, укрупняются

Проанализировав все вышесказанное, можно выделить несколько критериев, которые влияют на выраженность и локализацию поражения:

• путь проникновения трепонемы в организм;
• стадия заболевания;
• время начала лечения и сам подход к терапии.

Подготовка и показания к РПГА

Подготовки к анализу никакой не требуются, единственное исключение сделано для курящих. Последняя сигарета должна быть выкуренной не раньше, через 30 минут до сдачи крови, а лучше вообще отказаться от курения в этот день. Забирается венозная кровь из локтевой вены, и показано проведение этого исследования четырем группам пациентов:

• лицам, у которых есть симптомы и признаки сифилиса (к ним относятся вероятный шанкр, увеличение регионарных паховых лимфоузлов, непонятная кожная сыпь на фоне подозрительного анамнеза, вялотекущий менингит, диффузное облысение, симптомы сифилитической лейкодермы во втором периоде, либо подозрение на образование гумм, признаки спинной сухотки, звездчатые рубцы, говорящие о запущенном третичном сифилисе;
• лица, находящиеся в половом и бытовом контакте с больными;
• доноры;
• оформление санитарной книжки, профилактические медицинские осмотры, плановая госпитализация в лечебное учреждение.

Пятой категорией лиц являются те пациенты, у которых была выявлена положительная реакция на сифилис, полученная другими методами диагностики, чаще всего реакцией Вассермана.

Кто в зоне риска

Для проведения РПГА требуется направление от врача. Направить пациента на анализ могут в нескольких случаях:

1. Если имеются видимые признаки болезни. Сюда относятся язвы на коже, увеличенные лимфоузлы, частичное облысение волосяного покрова и пр.
2. Если у пациента был прямой контакт с больными сифилисом, для профилактики ему также необходимо пройти обследование.
3. Все доноры, сдающие кровь, обязаны проверяться на сифилис перед процедурой.
4. Для оформления санитарной книжки или ежегодных профосмотров на предприятиях также потребуется пройти необходимые обследования.
5. Если скрининг дал положительный результат.
6. На сифилис проверяют каждого, кого готовят к госпитализации в стационар.
7. Обследование пациента перед любой операцией также требует прохождения обследования.

Врач может назначить РПГА не только при подозрении на сифилис или для планового осмотра, но и для диагностики следующих заболеваний:

• дифтерии;
• дизентерии;
• сальмонеллеза.

С — 20. Серологические реакции РНГА или РПГА с одним диагностикумом

Особенности

• Стоимость: .
• Срок исполнения: 4 рабочих дней.
• Где можно сдать: В медицинском центре «ДИАМЕД» взятие биоматериала не производится. Необходимо по предварительному звонку заказать в центре «ДИАМЕД» стерильную пробирку и ознакомиться с правилами забора биоматериала в справочно-информационной службе по тел. (8342) 322-889
• Подготовка к анализу: Венозная кровь сдается утром натощак из вены.

Описание

Общая характеристика.

Реакция гемагглютинации. В основе реакции прямой гемагглютинации лежит способность эритроцитов склеиваться при адсорбции на них определенных антигенов. Поскольку это происходит без участия иммунной сыворотки, реакция не является серологической. В серологических исследованиях реакцию прямой гемагглютинации применяют для выбора рабочего разведения антигена, используемого в реакции торможения гемагглютинации. В основе последней лежит задержка гемагглютинирующего действия антигена специфической сывороткой.

Реакция непрямой гемагглютинации (пассивная гемагглютинация) наступает в том случае, когда к эритроцитам, сенсибилизированным антигеном, т.е. несущим на себе адсорбированный антиген, добавляют иммунную сыворотку, соответствующую антигену. Эта реакция часто превосходит по чувствительности и специфичности другие серологические методы, ее применяю при инфекциях, вызванных бактериями и риккетсиями. Реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА или РПГА) с танизированными эритроцитами проводят в двух вариантах: с известным антигеном для обнаружения антител (по Бойдену) и с известными антителами (сывороткой) для выявления антигена (по Рыцаю). Антигенами в реакции непрямой гемагглютинации могут служить очищенные антигены соответствующих микробов, экстракты бактериальных взвесей, надосадочные жидкости формалиновых, спиртовых, гретых бактериальных вакцин.

Показания к назначению анализа

Бактериальные инфекции, сальмонеллез, сыпной тиф, паратифы А и В, дифтерия, менингококковая инфекция и др.;

Идентификация выделенных микробов.

Материал для исследования: венозная кровь.

Метод: серологический.

Результат

Указывается наличие или отсутствие патогенных микроорганизмов и их видовая принадлежность. При получении их роста определяется чувствительность к антибиотикам.

Результат: в норме не обнаружено.

Интерпретация результата: В норме результат отрицательный.

Отсутствие роста в посеве может косвенно свидетельствовать в пользу кишечной инфекции, вызванной патогенными микробами (особенно на фоне начатого лечения). В острый период заболевания резко нарушается видовой состав микрофлоры кишечника, и нормальные представители вытесняются патогенными. При низком титре последних может наблюдаться отсутствие роста какой-либо флоры. В этом случае рекомендуется повторное исследование.

Источник: obsleduem.net